生物退浆酶的检测方法

退浆酶的主要成分就是α—淀粉酶.
α—耐高温淀粉酶 分光光度计法
1 原理：
α-淀粉酶能将淀粉链子中的α—1,4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝黑色的特异性反应，随淀粉降解蓝色逐渐减褪，渐变成红棕色，其颜色消失的速度与酶活性有关，故可在标准条件下，通过测定反应后溶液的吸光度计算其酶活力

2 试剂和溶液
1)原碘液：称取碘化钾22.0g溶于约300mL水中，加入碘11.0g,在搅拌下使其溶解，然后移入500mL容量瓶中，用水定容，贮于棕色瓶中备用(每月制备一次)。
2)稀碘液：称取碘化钾20.0g溶于300mL水中，准确加入原碘液2.00mL，全部移入500mL容量瓶中，用水定容，贮于棕色瓶中备用(须当天配制)。
3)20g/L可溶性淀粉溶液：称取可溶性淀粉(以绝干计)2.000g,精确至0.0001g,用水调成浆状物，在搅动下缓缓倾入70mL沸水中,然后，以30mL水分几次冲洗盛淀粉的小烧杯，洗液并入其中,加热煮沸2min直至完全透明，冷却至室温，全部移入100mL容量瓶，用水稀释至刻线。此溶液必须当天配制。
4)磷酸缓冲液(PH=6.0)：称取磷酸氢二钠45.23g、柠檬酸8.07g，用水溶解并定容至1000mL.配好后,用PH计校正。
5)盐酸溶液c(HCL)=0.1mol/L.

3 仪器和设备：
a）分光光度计 b）恒温水浴50℃-100℃,精度±0.1℃ c）试管:25mm×200mm d）容量瓶 e）自动吸管 f）秒表

4 待测酶液的制备
液体酶制剂:直接用缓冲溶液配制,使最终浓度控制在65-70u/mL范围内。

5 测定
1)吸取可溶性淀粉溶液20.0mL和缓冲溶液5.0毫升于试管中，在70℃恒温水浴中预热平衡5min。
2)加入稀释好的待测酶液1.00mL,立即用秒表记录时间,摇匀,准确反应5min。
3)立即用吸管吸取反应液b)1.00mL,加到预先盛有0.1mol/L盐酸0.5mL和稀碘液5.00mL的试管中，摇匀。
4)以0.1mol/L盐酸