【高分求助】鸡肝组织RNA提取问题

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/30 02:40:10
最近用Trizol提取鸡肝组织总rna，结果不甚理想，28，18的条带基本没有，5s的条带是很明显，我估计被降解，但是我在提取的过程中很是注意，应该是没有rna酶的污染。
但是提取过程中还是有些问题的，比如，用Trizol裂解后，离心，上清液是淡黄色的，加入氯仿后呈黄色的浑浊状，加入异丙醇后，就立刻有絮状物产生（估计是核酸），最后RNA为淡黄色。点样跑胶，没有发现基因组DNA，A260/280 为1.82（应该是纯度可以）

各位帮忙看看，有何异常
鸡肝是新鲜鸡肝液氮速冻，-80度保藏了3天
我用同样的试剂提取海拉细胞ok的

鸡肝新鲜不
充分研磨了吗，组织和细胞不一样，是需要机械辅助破碎的，否则等trizol浸透，RNA都被内源RNAase降解了，另外，还有可能细胞不能充分破裂，妨碍了RNA释放；
过程中开始几步rna污染不重要，最后几步特别重要，不能污染
5s是不是很亮的一片拖尾，如果是的话，就是降解了。

如果你是做RT，不妨接着试一次，记得设好阴性和阳性对照；如果做Northern，那就重提吧。

鸡肝RNAase多，提取时小心些。
或许:考虑以下几个方面：
1、组织选取：是否是新鲜的组织；
2、试剂：各试剂是否完全排除了RNAase的污染，要一种一种试剂的排查；
3、操作方法：是否合理，有无不规范的操作及不合理的实验设计；
4、运气。

考虑以下几个方面：
1、组织选取：是否是新鲜的组织；
2、试剂：各试剂是否完全排除了RNAase的污染，要一种一种试剂的排查；
3、操作方法：是否合理，有无不规范的操作及不合理的实验设计；
4、运气。

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上清液是淡黄色的，加入氯仿后呈黄色的浑浊状，加入异丙醇后，就立刻有絮状物产生（估计是核酸），最后RNA为淡黄色。点样跑胶，没有发现基因组DNA，A260/280 为1.82（应该是纯度可以）

首先是研磨，感觉不太充分，正常充分研磨后加入药品抽提后上清为无色透明为最佳，或者说引入的杂质几乎没有，氯仿浑浊正常，由于之前上清黄色，所以还是会黄色的，RNA沉淀离心后就能看出是否有了，RNA为白色粉末状，干燥时和沉淀时还是比较明显的，但是有时肉眼看不见不等于没有哈，量少而已，一般来说抽提时的上清颜色就已经能看出提的效果和结果了
至于为什么会黄色，可能是药品过量而引起和RNA以外的汾类等物质鳌合或者别的手法什么之类原因