基因克隆，P得的片断比预期中大，如何分析？

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/06/24 17:50:39
预期1200 实际1500
在200到500之间有一段序列

分析克隆结果及原因.

还问一个 氨基酸分析用什么软件？
在ncbi中将序列分析了一下
发现核苷酸同源性高达97
但是就是中间一段没测通
484 有内含子？
是cdna 可能提取RNA时 含有DNA而且未去除干净
那这样子出了这个结果应该如何分析呢？

2位仁兄都答得不错啊，所以我只能看大家的意见了
因为分不能给2个人 先在这里说2声谢谢o！

这是非特异扩增结果吧，一般差别不会这么大的，不行克隆一下去测序看看

用的什么做模板？基因组DNA还是cDNA？前者的话极可能是把内含子也扩出来了

简单的氨基酸分析可以用DNA STAR

查下精确序列，用酶切一下看看。
另像是非特异扩增，提高退火温度

1500应该能测通啊。是否跨内含子可以去ncbi blast，查到跨的内含子的长度，然后算一下就行了。一般不会出这种情况。

如果怀疑cDNA里面有基因组DNA的污染，可以
抽一点基因组DNA做个对照pcr一下就行了。