急急急!环丝氨酸富集法基本操作步骤是什么啊?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/18 14:58:12

基本操作步骤是:
(1)将外源片段与载体进行体外连接,并进行细胞转化,得到三种类型的细胞,即:未转化的细胞、Amp抗性Tet敏感型细胞和Amp抗性Tet抗性型细胞
(2)将细胞置于有四环素和环丝氨酸的培养基上培养,此时,只有Amp抗性Tet抗性型细胞能够生长,其他的都受到四环素的抑制
(3)Amp抗性Tet抗性型细胞长到一定程度后,由于环丝氨酸的渗入,而环丝氨酸是致命的,Amp抗性Tet抗性型细胞死亡
(4)此时若用洗涤离心法解除四环素的抑制,在将细胞置于有啊苄青霉素的培养基上培养,则未转化的细胞将不能生长,剩下的将只有Amp抗性Tet敏感型细胞,即我们所要的细胞
至此,就用环丝氨酸筛选出了我们所要的细胞