如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/31 16:04:12
如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来???
知道的一定要快点告诉我啊!!!

导入时用的运载体上如果有抗性基因(标记基因),就可以通过检测抗性基因的表达来检测,比如运载体PBR322 就带有抗四环素基因和抗氨卞青霉素基因
要么就等目的基因在受体细胞中表达以后,然后根据特定的性状来区分

常见的几种筛选方法如下
1.抗生素筛选法 菌株为某种抗生缺陷型, 而质粒上带有该抗性基因(如氨苄青霉素, 卡拉霉素等)这样只有转化子才能在含该抗生素的培养基上长出。
2互补法
现在使用的许多载体(如PUC系列)有含有一个大肠杆菌DNA的短区段,其中含有β-半乳糖苷酸基因(lacZ)的调控序列和头146个氨基酸偏码区。这个偏码区中插入一个多克隆位点。
受体菌则含编码β-半乳糖苷酶C端aa的序列。当外源基因插入时,二者溶为一体后,有β-半乳糖苷酶表达, 在生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(x-gal)培养基中形成兰色菌落。
而当有外源基因插入到多克隆原点,从而造成插入失活,而使lacZ基因不表达而形成白色菌斑。 通过颜色不同而区分重组子和非重组子。

动物?植物?微生物?都没说清楚啊
如果是微生物,带有抗生素筛选标记基因的话,可以用筛选剂筛选,未导入的死掉,转基因的存活;如果有lacZ基因,可以用蓝白斑筛选。
如果是动物细胞,带有荧光标记的话,可以在紫外灯下,用显微操作仪吸取出来,或者用流式细胞仪分离。
如果是植物细胞,就困难了,如果是悬浮细胞的话,也可以用流式细胞仪分离。

用同样的限制性内切酶再切出来就行啦,粘性末端是没有变啊。
再用DNA连接酶把原来的两端连起来就可以了啊。