想构建一个诱导稳定表达的细胞株,求助实验方案

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/10 06:36:32
想做一个P19细胞的诱导稳定表达的细胞株,想用pRevTRE/pRevTet-on系统可以吗?但我是研一新生,对质粒构建不是很了解,想请问一下构建过程中有什么细节要考虑到? 比如筛选标记,启动子,密码子偏好,终止子/加尾信号,CDS,是否需要报告基因等,但具体操作起来没有以前师兄师姐的指导感觉很难,请各位高手有实验操作步骤的不吝赐教!谢谢

用质粒好像不是很稳定，最好能整合到基因组上，可以用类似温和性病毒的载体，报告基因应该有，最好使用绿色荧光蛋白或者红色荧光蛋白，因为是诱导，所以需要可诱导的启动子，如果你表达的蛋白需要纯化，最好是加一个尾巴，用于纯化，否则应该不需要，筛选标记可有可无的，因为有红色荧光蛋白就可以用极限稀释法来构建单克隆细胞株了。
一点浅见仅供参考