谁能介绍一下替考拉宁的提取方面的知识,麻烦知道的介绍一下

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/30 02:41:05

1.溶剂萃取法
鉴于T—A2易溶于水、丙酮水溶液,在甲醇、乙醇等有机溶剂中能溶解的特性_9 J,可采用溶剂萃取法从发酵液中提取T—A2。Bardone[ J等曾首次采用非水溶性有机溶剂如氯化的C1一C4碳氢化合物或C4一C6链烷醇萃取T—A2。发酵液先过滤,滤液用l0%的盐酸(加少量氯化钠)调pH至3.5后用丁醇萃取,再经
高速离心、浓缩、冷却沉淀得粗品。其菌丝先水洗,用10%的盐酸调pH为3.5,再用丙酮水溶液(8:2)提取,蒸去丙酮,维持pI-I3.5不变。再经丁醇萃取,离心、浓缩、冷却沉淀出粗品。合并粗品,经HPLC及微生物检定法检测纯度为64.8%。另有专利报道了稍加改进的提取方法。即用水溶性有机溶剂如丙酮、乙腈、正丙醇、甲基乙基酮、二甲亚砜等直接加入到酸化的发酵液中(pH=3~4),聚集T—A2,经离心或过滤除去菌丝体,其溶液部分再经浓缩、冷却,沉淀出T—A2粗品。收率达64.5% ~88.7%。该法与上述两步法相比,操作简单,且提高了收率。

2 吸附法
T—A’抑菌的作用原理是它与细胞壁粘肽合成的前体UDP—N一乙酰胞壁酰一L一丙氨酰一 一D一谷氨酰一L一赖氨酰一D一丙氨酰一D一丙氨酸(UDP一五肽)末端,即D—Ala—D—Ala的游离羧基紧密结合,形成T—A2和N、N 一二乙酰基一L一赖氨酰一。
一丙氨酰一D一丙氨酸的复合物,干扰了细胞壁的正常合成,从而抑制了细菌的生长。而且实验证明T—A2对以D—Ala—D—A1a为末端的肽有高度的亲和性(Ka=1.5×106)⋯J。根据这一作用机制,通过将二肽D—Ala—D—Ala或多肽X—D—Ala—D—Ala(×为氨基酸残基)连接于载体上制成有生物选择性的亲和介质,能有效地进行分离纯化T—A2。其亲和载体可采用琼脂、葡聚糖、纤维素、聚苯乙烯或丙烯酸系共聚物等大分子物质,通过交联反应,与D~Ala~D—Ala或X—D—Ala—D—Ala相连形成亲和介质。也可将带有“手臂”(如6一氨基己酸,N一羟基琥珀酰亚胺或脂肪酸链)的载体与上述肽段相连形成亲和介质,直接
将发酵液装入有此类亲和介质的层析柱。实验表明此法能有效地分离纯化糖肽类抗生素,尤其是T—A2及T一 的衍生物Corti等曾运用Sepharos 4B— D—Ala—D—A