什么是核酸的退火温度?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/22 14:01:25
是PCR中的一个术语还是就是核酸复性中的一个概念?生化书上没有看到。网上甚至有说就是Tm。到底是什么啊?
我没有问什么是退火,没有问怎么PCR

加热使DNA双螺旋解开,在一定的条件下,两条互补的单链依靠彼此的碱基配对重新形成双链DNA的过程,亦即复性过程。热变性的DNA单链在缓慢冷却过程中可以达到很好的退火。退火的两条单链可以来自同一个双链的DNA分子,也可以来自不同的DNA分子。退火是变性的逆转过程,它受温度、时间、DNA浓度、DNA顺序的复杂性等因素的影 响。如PCR反应中引物与模板DNA的退火,核酸杂交中探针与被检DNA的退火。
在核算恢复活性时的温度是退火温度。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。
详细的还是看看下面这个网站
http://www.biox.cn/content/20050513/13054.htm

退火温度为引物和模板结合时候的温度参数,当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.它是影响PCR特异性的较重要因素。在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火, 同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。
在模板变性后温度快速冷却至40℃~60℃(某个退火温度)的时候,可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多,引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞,这就使PCR后期的过程成为可能。
退火温度与时间,取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸,G+C含量约50%的引物,55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度:
Tm值(解链温度)=4(G+C)+2(A+T)
复性温度=Tm值-(5~10℃)
在Tm值允许范围内, 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合, 提高pcr反应的特异性。复性时间一般为30~60sec,足以使引物与模板之间完全结合。

核酸加热到一定温度就会两条链分开,两条链分开就是退火(既