单独使用正戊醇或异戊醇或正辛醇可否沉淀蛋白?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/24 08:20:22
单独使用以上三种中的一种能否沉淀蛋白?
或者用什么方法可以比较好的使蛋白沉淀,得到澄清的上清液?

可以采用盐析的方法。盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使溶解的物质析出的过程。如:加浓硫酸铵使蛋白质凝聚的过程。
蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质分子之间聚集而沉淀。

饱和硫酸铵法
1. 取x ml血清加x ml生理盐水,于搅拌下逐滴加入2xml饱和硫酸铵,硫酸铵的终饱和度为50%。
2. 4℃,3h以上,使其充分沉淀离心(3000rpm),20min,充上清,以xml生理盐水溶解沉淀,再逐滴加饱和硫酸铵x/2ml。
3. 置4℃3h以上,[此时,(NH4)2SO4的饱和度为33%]重复上述第二步过程1~2次。末次离心后所得沉淀物为蛋白,以0.02%mol/L pH7.4PBS溶解至xml装入透析袋。
4. 对PBS充分透析、换液3次,至萘氏试剂测透析外液无黄色,即无NH4+为止。蛋白质在用盐析沉淀分离后,需要将蛋白质中的盐除去,常用的办法是透析,即把蛋白质溶液装入透析袋内(常用的是玻璃纸),用缓冲液进行透析,并不断的更换缓冲液,因透析所需时间较长,所以最好在低温中进行。此外也可用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐,所用的时间就比较短。
5. 取透析袋内样品少许作适当倍数稀释后,以751型紫外分光光度计测定蛋白含量。
方法如下:蛋白含量(mg/ml)=(1.45×OD280nm-0.74×OD260nm)×样品稀释度。