不知序列的DNA模板PCR引物的设计

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/06 01:05:09
引物不是要根据模板设计吗，可模板不知道序列，也许已知一段序列去不符合引物设计的要求 怎么办呢

如果在模板上加一个修饰片断，然后根据修饰的片断设计引物，可行吗？
我刚开始时学分生，所以什么都不太懂，望各位多多指教哦...

一般未知的序列旁边都有已知的一段吧，就是你说的“修饰片段”？
PCR这种flanking sequence可以有很多方法，比如TAIL-PCR，用ADprimer（简并引物）和特异性引物就可以得到目标片段

没有不符合要求的模板，只有设计不好的引物。
我不知道你说的这个“修饰片段”是什么东西。如果是一段接头的话，可以通过接头设计引物而扩增出中间的序列。

极特殊情况下可以在模板上加一段人为的片段方便引物杂交。一个引物要根据模板两端序列的性质来设计。 引物的设计要符合以下原则：1、G+C含量45～55％，2、长度15～25个核苷酸，3、奈温大于55摄氏度，4、扩增跨度300～500为宜，5、引物最末端倒数第二个碱基要严格要求配对，6、不能含自身互补序列，7、引物中有或能加上合适的酶切位点

现在模板一端加上poly-C尾巴，poly-
G就可直接作为引物了