UC知道用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒总是只有一条带怎么回事？？
来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/06/18 11:04:57
我用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒，但是酶切后电泳检测总是只有一条带，感觉没有切开，不知道怎么回事？？我已经重复酶切多次，而且也用来连接过，事实证明确实没有酶切开。但是我反复检查自己的操作都不知道问题出在哪里？？我实验室的师兄师姐也没办法了......
请高人指点啊~~~~~~
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一条带就对了，要是没切开会有好几条带的，双酶切后的小片段太短了，只有大片段的百分之几，所以亮度也只有大片段的百分之几，仪器的灵敏度也是有限的，就像肉眼看不到细菌一样，看不到不表示不存在啊。
NdeI 酶切之前必须用乙醇沉淀法重新纯化DNA，
直接用试剂盒抽提出来的DNA很难切动。
嘻嘻,这是个顽固的质粒.
XhoⅠ NdeⅠ相隔的距离是多远呢？如果很小的话，电泳时看不到小带的；如果同时酶切的效果不好，可以先酶切一个，回收DNA，再用第二个酶切，再回收，但要求起始质粒的浓度和量比较高！