Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制??

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/01 01:36:08
用Xho1和Nde1对载体质粒和目的片段分别进行双酶切,50μl的酶切体系应该怎样配制?我不知道每种试剂加多少好?(PS:反应体系中要用到BSA)。

谢谢大家了~~

由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10×H Buffer(使得酶切体系中的Buffer浓度为1×工作浓度),最后加入适量的质粒分子并双蒸水补足反应体积至50 μl。