植物基因组DNA可用植物根提取吗?具体步骤如何

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/23 15:01:31

原理上是可以的,但是我们是不会用植物的根提取DNA的。这样很麻烦!
首先是植物有细胞壁的,我们还要用纤维素酶果胶酶去除细胞壁,其次是细胞内的细胞器很多我们做实验的时候是要细胞核内的染色体的DNA,所以在书上所说的步骤中我们还要过滤掉杂质(各种细胞器,蛋白质)
这也是我们为什么要用成熟的红细胞提取DNA的原因,它高度分化,没有任何细胞器放入蒸馏水中后,由于细胞内的渗透压大于外界水中的,所以胀破了,再提取DAN就容易多了

可以啊。
活细胞就行。
液氮,研磨,加提取液。。。

植物组织提取基因组DNA
一、材料
幼嫩叶子。
二、设备
移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。
三、试剂
1、提取缓冲液Ⅰ:100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。
2、提取缓冲液Ⅱ:18.6g葡萄糖,6.9g二乙基二硫代碳酸钠,6.0gPVP,240ul巯基乙醇,加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、 RnaseA母液
5、其它试剂:液氮、异丙醇、TE缓冲液,无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。
四、操作步骤:
1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。
2. 幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤),室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
4. 室温下5000rpm离心5分钟。
5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团