Trizol提取RNA

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/24 09:03:49
用Trizol试剂盒抽提鱼肝脏RNA时,加入氯仿离心取出的上清加入异丙醇后,会出现大量絮状白色物质,离心后有大量沉淀,OD260/OD280约为1.5,估计沉淀中存在大量蛋白质,但为什么会出现此现象呢?同样的试剂和操作提取脾脏则无此现象,请高手指点

造成OD260/OD280偏低有两种情况:

1.DNA 污染
鱼类肝脏的DNA含量比较多。像你提到的加入异丙醇后又大量的白色絮状沉淀出现,极有可能是DNA没有去除干净。
造成DNA污染的原因主要是Trizol加入氯仿时混匀力度不够,造成DNA未被完全萃取。建议氯仿和trizol混匀时加大震荡力度。

2.蛋白质污染
吸取上清时吸取的上清过多,中间层的蛋白质。造成最后的蛋白质污染。严重影响提取RNA的纯度。

其实现在提取RNA,建议不要用Trizol。Trizol虽然是最经典的方法,但也存在着有机抽提(毒性较大),耗时较长,对操作者要求高等缺点。现行的硅胶柱能很好的解决这个问题。市场上Qiagen, Omega的产品都不错。Qiagen的价格稍高。

不同组织的蛋白含量和性质都是不同的,如果有蛋白沉淀,重新用氯仿抽提一次就还是了

重复几次除蛋白的步骤。

材料的蛋白太多了自然提取的时候残余的蛋白也多啊。