如何从动物组织提取酶??

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/31 09:37:19
例如,从兔子组织中提取肌酸激酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、ALP、MAO等,只需要粗提液,不需要太纯。请问,提取的具体步骤是什么?需要什么仪器,如匀浆机等?用什么提取液好?
越详细越好,有提取经验的大虾来。回答好的追加分。谢谢。
只要能提取到各种酶的混合物(包括各种酶和蛋白)就可以,不需要纯化。知道大体过程的也来。

从动物胰脏中提取胰蛋白酶,一般是用稀酸将胰腺细胞中含有的胰蛋白酶原提取出来,然后根据等电点沉淀的原理将提取液的pH值调至酸性(pH3.0左右),使大量的酸性蛋白沉淀出来。经硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原沉淀。沉淀物经水溶解并调至pH8.0,用极少量的胰蛋白酶将胰蛋白酶原激活,同时溶液中的胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原也被激活,三种酶原相互作用过程如下:

也可采用从胰脏中提取出胰蛋白酶原,利用合适的提取溶液的pH值促使胰蛋白酶原部分自溶,并通过溶液中Ca2+的环境,使胰蛋白酶原被开始自溶的少量具有活性的胰蛋白酶所激活,转变为具有活性的胰蛋白酶(胰凝乳蛋白酶原及弹性蛋白酶原亦同时被胰蛋白酶激活成有活性的酶)。
激活后的酶溶液再进一步分离纯化。

〔试剂和器材〕
1、试剂
(1)pH2.5~3.0乙酸化的水溶液
(2)10%(体积分数)乙酸
(3)2mol/L硫酸
(4)固体硫酸铵
(5)无水CaCl2
(6)结晶胰蛋白酶
(7)25%乙醇溶液(含0.015mol/LHCl 、0.05mol/LCaCl2)
(8)95%(体积分数)乙醇
(9)5mol/L NaOH
(10)丙酮

2、器材
(1)胰脏
(2)组织捣碎机
(3)离心机
(4)磁力搅拌器
(5)透析袋、20目筛网、纱布、水浴锅
(6)烧杯、量筒、刻度吸管、试管、玻璃漏斗
(7)布氏漏斗、抽滤瓶、温度计、滴管、玻璃搅棒、纱布、pH试纸等

〔方法和步骤〕
方法一
1、 胰蛋白酶原的提取
取新鲜胰脏约150g,剥去结缔组织和脂肪,取净重100g,切成碎块,在组织捣碎机中捣碎,并加入2倍体积预冷的pH2.5~3.0乙酸化水溶液,制成匀浆。浆液倒入500mL烧杯中,用10%(体积分数)乙酸调节pH在2.5~3.0之间,在5~10℃下提取6h以上,并间隙轻轻搅拌。用4层纱布过滤,尽量挤出滤液。组织残渣中再加入0.5倍体积(约50