PCR为什么要在冰上操作?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/03 21:48:14
做PCR的时候,如加各个反应液Taq酶,引物,dNTP,模板,PCR buffer等要在冰(冰盒)上操作?初次操作,很多不知道为什么?敬请答复。谢谢!!!

taq酶是耐高温的DNA聚合酶~
酶活在低温时几乎不显现但不至失活~放到PCR仪里时又能继续表现高活力
在冰盒上操作是防止反应底物提前在室温下发生反应~
操作时还有注意,尽量不用手去接触小管底部,而是轻拿靠近管口处,因为手上的温度可是够高的哟~

在冰上可以保持各种酶及底物不失活,同时也使得酶的活性很低
对于PCR的taq酶以及分子生物学中很多酶而言,在室温下是有活性的,若在室温下操作,你在东西未加好之前就已经有副反应进行了,这不利于实验
实际上,很多时候也没这么严格,PCR如果样品不多,完全可以在室温下操作

因为这些都很容易失活的,还有要注意引物和dNTP不要反复冻融,也容易失活的

这些个材料都容易变质,taq要失活,引物会降解,模板会断裂……所以要保持低温,而且用完要马上放回-20℃冰箱保存。

以上说的不够全面。
这个叫冷启动,第一怕TAQ酶降低活性,第二为更好的首轮解链,提高最终的特异性。