玉米干种子DNA怎么提取?详细的步骤,谢谢了?急用

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/24 14:40:25
玉米干种子DNA怎么提取?详细的步骤,谢谢了?急用

直接的方法没有,不过,干种子总DNA的提取方法都差不多,都是用改进的CTBA方法。这里有一个稻米的提取方法,你可以参考一下。

改进的CTAB 法提取糙米DNA

取水稻的一粒糙米于研钵中,加200 滋L 预热
(60℃ )破裂液研磨,转入1.5/mL 离心管中,加600/滋L
2%CTAB 溶液。65℃水浴15 分钟,期间不断混匀。加
600 滋L 氯仿:异戊醇(24:1),轻微混匀10 分钟。12
000 rpm 室温离心7 分钟,取上清液于另一1.5/mL
离心管中,加冷冻95%乙醇1 000 滋L 混匀,12 000
rpm 室温离心7 分钟,如果还存在杂质可再清洗和离
心多次。70%乙醇清洗两次,超净台上DNA 自然干
燥,加含1.0 滋L1RNA 酶的灭菌TE (或灭菌的双蒸
水)50 滋L,-20℃贮存备用。

详细文献地址:http://www.molplantbreed.org/full_text/pdffiles/2007_5_735.pdf

一、材料
玉米种子。
二、设备
移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。
三、试剂
1、提取缓冲液Ⅰ:100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。
2、提取缓冲液Ⅱ:18.6g葡萄糖,6.9g二乙基二硫代碳酸钠,6.0gPVP,240ul巯基乙醇,加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、 RnaseA母液
5、其它试剂:液氮、异丙醇、TE缓冲液,无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。
四、操作步