从自然界筛选青霉菌的大体方案

1·1 材料
1·1·1 样品:稻田土壤
1·1·2 培养基
1·1·2·1 增殖培养基
KH2PO4为2g, (NH4)2SO4为1·4g, MgSO4·
7H2O为0·3g, CaCl2为0·3g, FeSO4·7H2O
5mg, MnSO4为1·6mg, ZnCl2为1·7mg, CoC
为1·7mg, CMC-Na 20g,蒸馏水为1000mL, p
为5·5。
1·1·2·2 分离筛选培养基[4]
①刚果红纤维素琼脂: KH2PO4为2·0g, M
SO4为0·25g,琼脂为14·0g,明胶为2·0g,纤
素粉为1·88g,刚果红为0·20g,水为1000mL,
pH为7·0。培养基中的琼脂均需预处理以除去
能存在的碳源。
②滤纸条培养基:于直径为1·5cm,
1·5cm试管中加入上述无机盐培养基5mL,加
条瓦特曼滤纸(6cm×1cm)垂直于试管中,
部分露出斜面,加棉塞121℃30min灭菌。
1·1·2·3 鉴定培养基
土豆200g洗净,去皮,切成小块,煮
15min,纱布过滤,定容至1000mL,再加1%
萄糖, 0·05%胆酸钠, 1·5%琼脂, pH8·0·
1·1·2·4 发酵培养基
KH2PO4为2g,豆饼粉为30g, MgSO4·7H2
为0·3g, CaCl2为0·3g, FeSO4·7H2O为5mg,
MnSO4为1·6mg, ZnCl2为1·7mg, CoCl2
1·7mg,稻草粉50g,蒸馏水为1000mL, pH
5·5。
1·2 方法
1·2·1 纤维素酶生产菌的筛选[5]
1·2·1·1 初筛方法
将采集的样品取少许放入含有50mL增殖培
养基的300mL三角瓶中,在30℃、200转/min条
件下培养3~5d,然后分别稀释涂布于分离筛选
培养基上,观察菌落特征和透明圈大小,同时将
单个纯菌落分别接入滤纸条培养基中,于30℃静
置培养,定期目测滤纸条溃烂情