UC知道抽提植物幼叶DNA，结果电泳无带怎么办？
来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/09/25 11:52:56
请问一下我是用种子萌发的幼叶，还很嫩的叶片来抽提DNA，用酒精洗过之后也有大片沉淀，可是就是电泳之后没有带，MARKER带很好。不知道我的步骤有没有问题，还是材料的问题，因为叶片很幼小，如图。
l) CTAB抽提液，65℃预热;
2) 取约适量的叶片放入2ml离心管中，加入液氮，用研磨棒磨成粉末，加入1ml预热CTAB及10μL p-疏基乙醇，迅速混匀;
3）于65℃水浴45min，中途间隔(轻柔)振荡三次混匀;
4）冷至室温后加入等体积氧仿:异戊醇(24:l)，轻轻颠倒混匀10min;
5) 10000g离心10min(18—20℃);
6）吸取上清(约0.6mL)于另一干净的离心管中，加入等体积是仿:异戊醇(24:1)，轻柔颠倒混匀使乳化10min;
7) 10000r离心10min(18—20℃);
8）吸取上清，加入与上清液等体积且已于-20℃预冷的异丙醇和1/5体积的3moL NaAc，颠倒混匀，于一20℃冰箱中沉淀过夜;
9) 12000r/min离心10min，吸干液体;
10) 用1mL75%乙醇漂洗DNA沉淀，用Tip头吸干乙醇;
11) 用1mL75%乙醇再漂洗一次;
12) 用lmL无水乙醇再漂洗一次;
13) 沉淀于室温或60℃以下的恒温箱中干燥片刻至刚出现半透明;
注:不要过度干燥
14) 用500μL TE溶解沉淀，可用65℃水浴助溶; 保存于-20℃。
15）向TE的溶解物中加入2μL 10mg/ml RNaseA。
16）于37℃酶解RNA1h。
17）12000g常温离心10min，吸取上清。保存于-20℃。
电泳的话MAKER没有问题跑的很好，但是就是样品跑不出来带。
A260/A280测过，有1.6多，还有5的。
l) CTAB抽提液，65℃预热;
2) 取约适量的叶片放入2ml离心管中，加入液氮，用研磨棒磨成粉末，加入1ml预热CTAB及10μL p-疏基乙醇，迅速混匀;
3）于65℃水浴45min，中途间隔(轻柔)振荡三次混匀;
4）冷至室温后加入等体积氧仿:异戊醇(24:l)，轻轻颠倒混匀10min;
5) 10000g离心10min(18—20℃);
6）吸取上清(约0.6mL)于另一干净的离心管中，加入等体积是仿:异戊醇(24:1)，轻柔颠倒混匀使乳化10min;
7) 10000r离心10min(18—20℃);
8）吸取上清，加入与上清液等体积且已于-20℃预冷的异丙醇和1/5体积的3moL NaAc，颠倒混匀，于一20℃冰箱中沉淀过夜;
9) 12000r/min离心10min，吸干液体;
10) 用1mL75%乙醇漂洗DNA沉淀，用Tip头吸干乙醇;
11) 用1mL75%乙醇再漂洗一次;
12) 用lmL无水乙醇再漂洗一次;
13) 沉淀于室温或60℃以下的恒温箱中干燥片刻至刚出现半透明;
注:不要过度干燥
14) 用500μL TE溶解沉淀，可用65℃水浴助溶; 保存于-20℃。
15）向TE的溶解物中加入2μL 10mg/ml RNaseA。
16）于37℃酶解RNA1h。
17）12000g常温离心10min，吸取上清。保存于-20℃。
电泳的话MAKER没有问题跑的很好，但是就是样品跑不出来带。
A260/A280测过，有1.6多，还有5的。
过程没有问题，最有可能的失误：你在其中的（第十七步）把dna给倒掉了！rna酶解rna后高速离心，dna是在底部的：就向你的第九步一样！建议你找本生物技术手册认真学习一下。推荐：《植物分子生物技术应用手册——生物实验室系列》出版社：化学工业出版社 出版时间：2006年02月 作者：彭学贤 主编
75%乙醇洗的时候很容易把DNA滑掉了，我洗掉过
很可能是某步吸干液体时把dna吸出去了
我们之前实验经常有这种情况
那东西稍不注意就一起吸出去了
你过程没错，可能是你点样时出差错了。。。
莫非你的琼脂糖有问题
同意楼上的，第17步不需要离心，而且还离心了那么久。另外异丙醇沉淀最好不要放置就去离心，不要放过夜，基本加完混匀就去离心。用乙醇沉淀过过夜沉比较好。另外，换一管RNA酶试试，可能混进去DNA酶之类的东西37度一消化就什么都没了。 你可以同时做几管对照分别采用上面说的改进办法试试看。
分光光度测得结果是多少？