高效液相色谱梯度淋洗中溶剂极性顺序如何？

对于反相的HPLC，梯度洗脱的流动相是有机相比例从小到大，水从大到小。
作为方法建立，可选择如下步骤：
1. 乙腈-水（0：100）-（100：0），没有选甲醇的原因是甲醇-水粘度大（尤其在与水大概55：45时），这样如果可以换等度的时候柱压较高，又有背压调节的问题；
2. 根据若干目标物出峰的时间，可以大致推算当时的流动相比例范围，找到1个比较精确的梯度表，注意，因为有柱前体积，出峰时刻显示的流动相比例与实际的柱上比例是有滞后的；
3. 进一步的调整，以达到满意的分离效果，和尽量短的分析时间；
4. 目标物如果是可解离的（酸性物质或碱性物质），水相中可以加入酸（和或三乙胺），或用buffer，如果是蛋白质、肽类，一般可加入三氟乙酸；
5. 能够进一步调整的还有柱温和流速。
就我个人的意见，如果能用等度，还是尽量用等度洗脱。

无论是等度还是梯度，都不影响正反向啊！

看你的色谱柱选择是正相（如氰基柱）还是反相（如C18）

你的问题不是很清楚，选择梯度一般在分离极性相差很大的物质，一般是前段用大极性，再逐步加大有机相比例

环已烷 :-0.2、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2
数值越大，极性越大

反向色谱，一般是先选择极性大的，比如乙腈，后选择极性小的，但可多时候要加三氟乙酸（乙酸、磷酸、柠檬酸）和三乙胺（醋酸铵）等调节PH值。