急问:从人血液中分离淋巴细胞
来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/19 20:10:48
我就是按照你们的步骤的,就是这个问题出现
其实可以加一点红细胞裂解液这样就没有红细胞了
白色的可能是胶原纤维
呵呵 我把整个试验给你 很详细的
目的
了解密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理及其操作过程。
原理
淋巴细胞分离掖是由60%的聚蔗糖2份和34%的泛影葡胺1份混合制成。它具有分子量大、无化学活性、20℃时比重为1.077士0.001的特性。血液中各种细胞的比重不同,淋巴细胞与单核细胞的比重约为1.070,而粒细胞和红细胞的比重为1.092左右。将血液加至分离液上,通过离心,可使一定比重的细胞按相应密度梯度进行分布,从而将淋巴细胞与其它血细胞分离开。
材料
1. 淋巴细胞分离液 (比重1.077土0.001)。
2. 肝素。
3. 无Ca2+、Mg2+的Hanks溶液,pH7.2~7.6。
4. RPMI-1640培养液(含10%小牛血清)。
5. 其它:注射器、吸管、滴管(均为无菌),血球计数板,水平离心机,显微镜等。
方法
1. 无菌抽取静脉血2ml,去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀,加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释,混匀。
2. 用吸管吸取稀释血液沿试管壁缓缓加到含有2ml淋巴细胞分离液的试管中(血液:Hanks液:淋巴细胞分离液的比例为1:1:1),沿管壁流下的稀释血液叠加在分离液之上,并与分离液形成明显的界面。
3. 经水平式离心2000r/min×20min,小心取出试管。
4. 用平口吸管小心吸取中层呈白色雾状的淋巴细胞层,用Hanks溶液洗涤两次,每次离心1500r/min×10min。
5. 弃上清,加RPMI-1640培养液1ml混匀,取少许进行细胞计数及活力测定。
(1) 细胞计数: 取1滴细胞悬液置血球计数板上,静置片刻,显微镜下计数四角四个大方格内的细胞数(见图15),按下列公式计算出细胞总数。
四个大方格细胞总数 ×稀释倍数×细胞悬液毫升数×104
细胞总数 = 4
(2)台盼蓝拒染法测定细胞活力: 取4份0.2%台盼蓝与1份4.25%生理盐水混合,将台盼蓝生理盐水溶液与细胞悬液等量混合,