如何保证革兰氏染色实验结果的可靠

保证革兰氏染色实验结果可靠的方法：

1. 革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。

2. 染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。

3. 选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。

4. 脱色时间不要过长。

革兰氏染色步骤： 

（1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。 

（2）晾干：与简单染色法相同。 

（3）固定，与简单染色法相同 

（4）结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟。 

（5）水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。 

（6）媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染1min。

（7）水洗：用水洗去碘液。 

（8）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色，立即水洗。 

（9）复染：滴加蕃红复染5min。 

（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。 

（11）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干。 

（12）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。

（13）实验完毕后的处理： 

①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。

脱色时间不要过长，晃几下就可以。
同时还可以做3%氢氧化钾