过夜消化法制备鸡胚成纤维细胞

罗斯鸡受精蛋900枚孵化至第13d时随机分为3组。第1组为正常对照组，孵化过程中不作任何处理；第2组在孵化第13d向气室内注射甲状腺激素（T＿4）；第3组向气室内注射硫尿嘧啶。分别测定孵化第17d、第19d及1、5、10、15、20日龄小鸡的腺胃、十二指肠与胰腺匀浆消化酶的活性，检查啄壳迟早、孵化率与雏鸡卵黄囊吸收情况。结果表明：鸡胚胎后期淀粉酶活性增加很快，出生后20d内随日龄增加酶活性仍有少量增加。胚胎后期至5日龄前鸡脂肪酶活性增加较快，15日龄后活性不再增加。胚胎后期至20日龄间鸡胃蛋白酶活性随日龄而逐渐增加。胚胎后期至10日龄鸡胰蛋白酶活性逐渐增加，10日龄后酶活性不再增加。甲状腺素与硫尿嘧啶处理鸡胚对小鸡消化道酶活性无显著影响（P＞0．05）。甲状腺素处理使鸡啄壳延迟、孵化率降低（P＜0．05），雏鸡对卵黄囊内的卵黄的吸收显著减慢（P＜0．05），一直到15日龄30．2％处理鸡仍有0．4～3．89卵黄尚未吸收。硫尿嘧啶处理对鸡的孵化性能和对卵黄囊吸收无显著影响。

鸡胚组织是组织培养最早被利用的对象。早年组织培养工作者，如Carrel等曾用鸡胚做过大量研究工作。目前，鸡胚成纤维细胞已被广泛应用于细胞和分子生物学研究的许多方面，这主要是由于成纤维细胞是最易培养的细胞，其良好的耐受性使之易于进行从基因转染到微注射等较多领域的研究。本试验经长期摸索、比较、找到一种制备鸡胚成纤维细胞的优化方法——室温消化法。

1 材料与方法
1 ． 1材 料 1 0 1 3 龄 S P F鸡胚由广东省永顺兽 医厂提供 。D ME M原粉购自美国 G I B C O公司，按说明书添加双蒸水、N a H C O ， ， 调 p H值至 7 ． 0 ， 正压滤过除菌， 4 ~ C 保存 。使用前添
加 1 0 ％~ b牛血清、 1 ％双抗。 小牛血清购 自上海实生细胞生物技术有限公司， 一 2 0 ~ C 保存 ， 使用前 5 6 ℃水溶 3 0 m i n ，再用孔径 0 ． 2 2 m的滤膜滤过除菌。 Ha n k s 液用江苏宜兴市赛尔生
物化工厂生产的 Ha n k s 液干粉，按说明书添加双蒸水正压
滤过除菌， 用前调pH值至 7.2—7.6,4℃保存。 2.5g/L胰蛋白液由