黄颡鱼肿瘤坏死因子的基因兼并引物怎么设计啊？急......

找与此物种亲缘关系比较近的物种，将它们的核苷酸序列找出来，然后比对寻找高度同源的区域，引物就设在同源的位置
　　简并引物是指用来编码一段短肽序列的不同碱基序列的混合物。主要用来同源克隆未知的基因，或用来分析某一种基因多态性的一种方法。简并引物设计的常见程序如下：1. 利用NCBI搜索不同物种中同一目的基因的蛋白或cDNA编码的氨基酸序列。
　　因为密码子的关系，不同的核酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的Entrez检索系统，查找到一条相关序列即可。随后利用这一序列使用BLASTp(通过蛋白查蛋白)，在整个Nr数据库中中查找与之相似的氨基酸序列。
　　2. 对所找到的序列进行多序列比对。
　　将搜索到的同一基因的不同氨基酸序列进行多序列比对，最好采用局部比对程序如BLOCK，网址：http://bioinformatics.weizmann.a ... ww/make_blocks.html。也可选工具有Clustal W。
　　3. 确定合适的保守区域。
　　设计简并引物至少需要上下游各有一个保守区域，且两个保守区域相距50～400个氨基酸为宜，使得pcr产物在150~1200bp之间，最重要的是每一个保守区域至少有4个氨基酸。若比对结果保守性不是很强很可能找不到4个氨基酸的保守区域，这时可以根据物种的亲缘关系，选择亲缘相近的物种进行二次比对，若保守性仍达不到要求，则需进行三次比对。总之，究竟要选多少序列来比对，要根据前一次比对的结果反复调整。最终目的就是至少有两个4个氨基酸且两者间距离合适的保守区域。
　　4. 利用软件设计引物。
　　当得到保守区域后，就可以利用专业的软件来设计引物了，如利用primer 5.0进行设计。但最好使用专门的简并引物设计的方法如：CODEHOP（网址：