植物细胞杂交与组织培养相似之处的步骤

植物体细胞杂交过程：

将植物细胞A与植物细胞B用纤维素酶和果胶酶处理，得到不含细胞壁的原生质体A和原生质体B，运用物理方法或是化学方法诱导融合，形成杂种细胞，再利用植物细胞培养技术将杂种细胞培养成杂种植物体。
①杂交时间：植物细胞杂交是从细胞融合开始，到培育成的新植物体结束。
a.原生质体制备：用酶解法去除细胞壁（纤维素酶和果胶酶）
b.原生质体融合：膜融合（高钙、高pH诱导融合）、核融合（杂种细胞第一次有丝分裂时融合）
原生质体的融合
一、融合方法
1．PEG诱导融合法
 PEG诱导融合的特点：其优点是融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较
高；融合过程不受物种限制。其缺点是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害。
 PEG的作用机理： Kao等认为，由于PEG分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极
性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成H键，从而在在原生质体之间形成分子桥，其
华中农业大学创建国家精品课程——细胞工程学 文本教案(第七章) 主讲教师：柳俊博士、教授
结果是使原生质体发生粘连进而促使原生质体的融合；另外，PEG能增加类脂膜的流动
性，也使原生质体的核、细胞器发生融合成为可能。
 融合技术要点：
融合液：CaCl2·2H2O 8~10mmol
KH2PO4 0.7mmol
甘露醇或山梨醇 0.5~1.0mol
pH 5.6
诱导液：融合液＋PEG 20～45％
稀释液：A液（g/100ml）pH6.0 B液（g/100ml）pH10.5
葡萄糖 7.21 甘氨酸 0.375
CaCl2·2H2O 0.79 NaOH 0.169
DMSO 10ml
2．电融合法
 与PEG融合比较起来，电融合有三大优点：一是不存在对细胞的毒害问题；二是融合效率高；三是融合技术操作简便。
电融合仪的结构特点：