利用葡聚糖凝胶分离蛋白

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/15 01:58:13
请问此时可用的缓冲体系有哪些?

一般是磷酸盐,如:K2HPO4-KH2PO4,要注意的有两点:
一是pH值,不要选在等电点;二是盐浓度,不能超过柱子的允许范围(手册上有)。
另外,这种柱子很娇气,也很贵,使用时一定要小心。

葡聚糖凝胶(Polydextran),商品名称是Sephadex
Polydextran几乎不溶于溶剂中,亲水性强,能迅速在水和电解质溶液中膨胀,在碱性的环境中十分稳定,所以可以用碱去除凝胶上的污染物。
Sephadex G-X,X表示葡聚糖的交联程度,数值越大则交联度越小,但吸水量越高,X值大致是吸水量的10倍。以Sephadex G-25为例,表示1克干燥的G-25凝胶可以吸水2.5 ml。
Sephadex的分离范围与填料粒经和交联度密切相关,大概范围如下:
型号 粒度(微米)有效分离范围(球形蛋白质)
G 10 55-166 <700
G 15 60-180 <1500
G 25 - 1000-5000
G 50 - 1500-30000
G 75 - 3000-80000
G 100 - 4000-150000
G 150 - 5000-300000
G 200 - 5000-600000

Superdex属于葡聚糖以共价结合到交联多孔琼脂糖珠体上的球形凝胶,流速快、反压低。
型号 粒度(微米)有效分离范围(球形蛋白质)
Superdex 30 24-44 <10000
Superdex 75 24-44 3000-70000
Superdex 200 10000-600000
操作实例(转载)
1) 凝胶溶胀
凝胶颗粒要求大小比较均匀,可流速稳定,结果较好。取葡聚糖Sephardex G-75干粉,加过量的蒸馏水室温充分溶胀一天(溶胀时间因凝胶交联度不同而不同),或沸水浴中溶胀3小时,这样可大大缩短溶