盐酸胍的检测标准或方法

盐酸二甲双胍(metformin)是口服降糖药,具有降糖作用明显、不良反应少等特点, 广泛用于治疗2型糖尿病。临床常用剂型有普通片、普通胶囊、肠溶片及肠溶胶囊等。近年来,随 着缓、控释技术的发展,出现了二甲双胍的缓释片。关于二甲双胍的血药浓度测定法,国内已经有 多篇报道,但这些方法存在灵敏度较低或前处理烦琐等缺点。为此,本实验建立了一种操作简单、灵敏度高的二甲双胍高效液相色谱测定方法。
1 仪器和试药Shimadzu LC—10ADP 高效液相色谱仪,SPD—10AP检测器,浙江大学N1000工作站。盐酸二甲双胍对照品由 江苏省药物研究所提供,含量99.4%;内标苯乙双胍购自中国药品生物制品检定所。磷酸氢二 氨、甲醇、乙腈均为色谱纯,所用水均为二次纯化水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:HypersilSilica 柱(4.6 mm×250 mm,5μm),保护柱为自制,填料为 silica;流动相:磷酸盐(50 mmol·L-1,用磷酸调节 pH 6.7)-甲醇(50∶50);流速:1.0 mL·min-1;柱温:35 ℃;检测波长:233 nm;进样量:10μL。
2.2 对照品溶液和内标液的配制 精密称取二甲双胍10 mg,用100 mL纯化水溶解配成100 mg·L-1的药物母液, 用时稀释成标准工作液。精密称取苯乙双胍10 mg,溶于400 mL纯化水中,配成25 mg·L-1的内标溶液。
2.3 血浆样品处理 -20℃冷冻保存的血浆在暗处自然融化,3 000 r·min-1离心5 min,取0.5 mL于离心试管中,准确加入内标液20μL,混匀30 s,再加入乙腈1.0 mL,旋涡振荡2 min,160 000 r·min-1 离心10 min,取上清液10μL进样。
2.4 色谱行为 二甲双胍和苯乙双胍的保留时间分别为10.07 min和6.95 min,二者分离良好,血浆中杂质对其无干扰。测得的空白血浆及血浆样品的色谱图见图
2.5 标准曲线的制备 取空白血浆0.5 mL,置 7 支离心试管中,分别加入不同浓度的二甲双胍标准液,混匀,使其浓度分别为20,50,200,500,1 000,2 000,图1 高效液相色谱图A.空白血浆 B.空白血浆+二甲双胍+苯乙双胍