镍柱纯化总有一条杂蛋白怎么办？

可以使用咪唑梯度洗脱，不知道你用的是什么仪器,有杂蛋白说明咪唑浓度还是太高啊

你的纯化方法有点问题。
Ni柱纯化蛋白一般都要用梯度洗脱。
一般用20mM、50mM、100mM、250mM，差不多用250mM洗下来的才是你的蛋白，
40mM肯定有一些杂蛋白的啊，建议40mM洗完了，继续用250mM洗脱。

我感觉可以从如下的方面入手分析：
1.结合及冲洗缓冲中加入10mmol左右的imidazole，这样可以和弱亲和（比如说His数目较少）的杂蛋白有一个竞争关系，减少杂蛋白吸附。
2.适当减少凝胶体积，所用凝胶的理论载量不要大于目的蛋白太多。
3.加入盐、乙醇、甘油等减弱目的蛋白与杂蛋白之间的非特异性吸附。加入还原剂避免目的蛋白与杂蛋白间形成二硫键。
4.纯化过程中加入蛋白酶抑制剂，防止目的蛋白降解，产生带有His-tag的杂蛋白。

前几天我也镍柱纯蛋白了,我的蛋白分子量是52KD大小的,先用20mmol咪唑洗柱,接着再用30mmol洗,洗脱蛋白时的浓度是150mmol,结果还不错,你可以试试