日语“兄上”是指哥哥吗？在什么场合用？

是的。类似还有父上、母上、姉上等。
雅虎日本的词典中有解释：兄を敬っていう语。
用这个称呼叫哥哥的话，表示极其尊敬。
历史剧中用的比较多，现在不太用了。

历史剧皇室中弟弟称呼哥哥敬语。

是啊。
可是除了历史剧中我没有听过。

お兄様（おにいさま）
大哥。

是。比较郑重的叫法。

是的，一般是历史剧中的皇室中，相当于中国的‘皇兄’吧