请教TGGE银染步骤

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/21 15:55:29
请教TGGE银染步骤
我用的方法是：
固定：10%冰醋酸20min
清洗：3次，每次2min
染色：400ml0.1%硝酸银新鲜配制，用前加600微升37%甲醛
清洗：3次，时间分别为30s，1min，30s
显影：1L3%碳酸钠（4度预冷），用前加1.5ml37%甲 醛
可是加入显影液后没有反应，请问是什么原因。
大家做过的帮帮我，我的QQ是525093899，非常感谢！
感谢两位的帮助,现在染色的问题已经解决,是碳酸钠的问题,新买了一瓶,就可以了.只是现在又有了问题,就是染色后都是拖尾,没有清晰的条带,如图所示.我做的是TGGE,产物是16S V3区的扩增产物,琼脂糖电泳显示PCR产物的质量很好,TGGE电压135V,14h,可就是跑不出条带,请教是哪里出了问题?谢谢!

我个人的染色方法，仅供参考：

银染：将凝胶于水中取下，蒸馏水洗2次；加入新配制的0.1%硝酸银溶液及旧的硝酸银溶液各250ml，摇床摇30min至溴酚蓝带颜色褪淡。蒸馏水洗一次。

显色：加入约500ml显色液（15g氢氧化钠+0.19g四硼酸钠，加水至1000ml），并加入甲醛1.5~1.8ml，摇床上轻摇，约5min即显现条带，至效果满意后倒去染色液，以蒸馏水清洗2次。拍照，扫描。

看你的实验步骤，应该问题不大。可能是一些细节影响了实验。其中最主要的是染色一步需避光操作。另外还有，所要器皿保持清洁，用水需取三蒸水，腰带干净的手套后碰胶，等等。
每一步都需小心操作。
再试试，若果还不行，我把我的protocol告诉你。