如何稀释实时荧光定量PCR的引物?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/18 15:33:20
我马上要做实时荧光定量PCR了,引物已经获得,引物管上面的标注是:OD=2,nmoles=9.96,现在我要把引物干粉溶解成100pmol/ul的储备液,请问我该加入多少微升RNase-free ddH2O 呢?

1纳摩尔(nmol)=1000皮摩尔(pmol)

9.96nmol/X=100pmol/ul
解出X=99.6ul

答:加入100微升vddH20

PS。。。。一般我们买回引物,管它那么多,都加100微升水用着,没啥问题- -

100pmol/ul= 100umol/L= 100uM (Standard stock concentration of PCR Oligos)

V= 摩尔体积/摩尔浓度= 9.96nmol/100uM= 9.96nmol/ (100umol/L)=
9.96nmol/ (100000nmol/L)= 0.0000996L= 99.6ul

Hence, add 99.6ul Rnase-free ddH2O.

对任意PCR引物,正确加水体积应为V(ul)=N (nmol)*10,即浓度为100uM. ie,9.96*10= 99.6ul

注:一般情况下,所有PCR引物的stock concentration都是100uM. 使用时将其稀释十倍为10uM进行PCR反应。

另:拿到PCR引物后,应先13.2k rpm离心一分钟,加入65摄氏度预热ddH2O配置成100umol溶液,再65摄氏度水浴1分钟后储藏。

再注:一楼为山寨加水法,千万不要学习。我不知道中国的生物公司,像IDT这种公司作出的引物,由于序列差异,摩尔浓度相差还是很多的。我曾经订过100bp+ 的引物,和20bp+的引物完全不是一回事...

你确定你要的是pm级的??如果你确定,那就是要加99.6微升的水,记住,溶解之前一定要高速离心两分钟,开盖的时候要小心,避光,用锡箔纸包住

1纳摩尔(nmol)=1000皮摩尔(pmol)

9.96nmol/X=100pmol/ul
解出X=99.6ul

答:加入100微升vddH20