蛋白质N端和C端的测定方法是什么？基本原理是什么？

自己看，我也没有学好！http://www.fx120.net/yxlw/jcyx/swhx/200607191514084875.htm
一种简便的蛋白质N端氨基酸测定方法

第二军医大学学报2000年第21卷第3期

张平武 魏林 项洪刚 孙树汉

关键词：氨基酸序列；氨基酸N端

蛋白质（或多肽）的两端氨基酸序列测定是分析未知蛋白质的结构和功能的基础。目前蛋白质N端序列分析的技术已较为成熟，可达20～40个氨基酸残基，但由于N端氨基酸序列分析成本高(1400～4 000元/次)，不大可能反复多次检测。有些多肽N端氨基酸是封闭的，降解后才能进行氨基酸序列分析。如果事先知道N端氨基酸是否封闭，一方面有利于选择序列分析的方式（N端、C端或降解后测序），另一方面可节省费用，也利于测序结果的分析。一个结构未知的酵母分泌蛋白，其相对分子质量为7.9×104，我们在分析其结构时采用DNS-Cl法对其N端氨基酸进行了测定，知其N端未封闭，然后进行氨基酸序列分析，取得了很好的效果。

1 材料和方法

1.1 样品和试剂 经SephadexG100和DEAE-52柱层析纯化后的酵母分泌蛋白质〔1〕，相对分子质量为7.9×104，其他为国产分析纯试剂。

1.2 反应 取400 μg纯化蛋白质，溶于50 μl (0.2 mol/L)的NaHCO3溶液，用1 mol/L NaOH调pH 10.0，加去离子水定容至250 μl。在一小指管内加入上述溶液及200μl DNS-Cl丙酮液（2.5 mg/ml）,石蜡膜封口，40℃温育55 min。真空抽干2 h。在管内加入0.2 ml 6 mol/L HCl后将管口密封，10℃水解反应12 h。真空抽干后加入2滴0.2 mol/L NaHCO3,并用1 mol/L HCl调pH至2.5，加入乙酸乙酯5滴，稍加摇动,DNS-N端氨基酸即在乙酸