TRIzol法提取RNA如何避免DNA污染

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/22 05:11:08
我提的是植物的RNA，提取出的RNA是做RT-PCR合成CDNA用的，每次提取的RNA跑琼脂糖凝胶电泳后，看起并无DNA污染，但用特异引物和ACTIN引物从RNA里里能扩出里面有DNA污染，请问有做过这方面的实验的，有什么方法避免吗？

1,裂解组织或者细胞使用的TRIzol量偏少；
2，使用的组织材料中含有大量的有机溶剂（如：乙醇/异丙醇等）、高纯度的Buffer、碱性溶剂等；
3，如果提取的RNA中含有DNA时，也可以使用DNase I进行DNA消化。

　　

除了上楼的方法——一般操作都需要那样进行的。

还有，如果你对rna质量要求很高的话，可以用dna酶去除dna污染。不过有可能导致rna的部分降解。或者也可以纯化rna，这些步骤都可以避免dna污染。
不过dna酶慎用！

我也是类似问题，RNA用TAQ酶扩出片段。。。闷
可以在RT前用DNASE1处理~
方法：RNA(1ug）+BUFFER（1ul）+water（to9ul)+DNASE（1ul） 37度30分
+ 25mM EDTA 60度 10分钟
然后不换管直接在里面加RT的东西 最后定容到20ul 上PCR