ELISA双层夹心法实验中2抗、1抗和抗原是怎么结合的?

ELISA原理是双酶联免疫吸附夹心测定，所以其中利用的是抗原抗体特异性结合。

是用空气结合的

首先明确一抗，二抗，抗原之间的关系：“一抗”是针对“抗原”的抗体，也就是说一抗跟抗原可以特异性结合；“二抗”是针对“一抗”的抗体，即二抗跟一抗可以特异性结合；而“二抗”与“抗原”之间一般没有什么联系，两者之间不会产生作用。
ELISA中不管什么方法，原理都是抗原与抗体之间的特异性结合。你说的双层夹心法也是同样道理。