琼脂糖胶回收大片段DNA的方法求助

我没有用过国内的试剂盒，不过我非常肯定问题出在哪里。

首先，给你看一下Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System的回收效率与DNA大小的关系（下图）。这家公司的purification肯定比天根的好，但是在回收23000bp的DNA片段时，回收效率只剩下47%，这是因为回收DNA片段过大，即使在加水或者TE buffer溶解后，也无法滤过纯化柱，导致部分DNA遗失。而且，如果你是从琼脂糖胶上回收的DNA片段，回收率要再下降将近50%，这就是为何你的DNA回收效果不理想的原因。

我不是很明白什么叫做“片段要比回收前小”，难道你是直接将PCR产物进行纯化而没有做凝胶纯化吗？直接纯化对多个大片段DNA的纯化是没有意义的。所以，一定要先将你的全部PCR产物做凝胶电泳，再切出你的目标DNA片段，做凝胶纯化回收。

从你的实验结果看，估计你所用的试剂盒根本无法滤过23000bp的DNA分子，而只滤过了较小的杂质片段，这也是为什么纯化后目标基因变小的原因（实际上你回收的是杂质）。建议你联系天根公司，看他们是否有其他针对大片段DNA的试剂盒（我在国外，所以实在不知道国内的试剂品种，抱歉），然后，一定要做凝胶回收，而不是PCR产物直接纯化！

琼脂糖回收的DNA的问题 为什么融胶法回收DNA中，琼脂糖凝胶加入盐溶液，如NaI就能溶解？ 请问从酶切后的溶液中如何回收DNA(不用切胶回收的方法)回收后的PCR产物是否适合于表达载体连接? 有谁知道"琼脂糖的提取方法" 垃圾回收的方法 dna的提取方法 DNA纯化的方法? DNA 提纯的方法 废电池的回收方法 易拉罐回收利用的方法