关于过柱子梯度洗脱的问题

过柱子要具体问题具体分析。你提供的信息太少了。TLC上有几个点，你确定的Rf是多少，柱子的大小，分离物质的量。
目前的极性过大了。减小极性，比如EA：PE=1:1-1:2（找用TLC趴一下，我只是估计值）,将第2点压制到Rf=0.1-0.2之间，用该极性洗脱剂过柱。可以保证1，2，3点完全分开。
或者将第2点趴到Rf=0.3，然后将极性减小一倍。该极性和前面方法得到的差不多大。
柱子大小和样品量还可以。先将样品上柱，干法最好，若用湿法上样则先用石油醚冲下50mL，再改用洗脱剂淋洗。淋洗液的极性从第2点Rf=0.1时候的极开始性，当出现第一点时，逐渐放大淋洗液的极性，到出现第2点时，继续放大到Rf=0.2时候的极性。

其间具体放大多少，视第1点和第3点的Rf而定，与距离第2点的远近有关。

啊，你是要写作业还是要真的过柱呀？过柱每个人的经验都不一样的，一样都过得很好的。
首先，你要确定好洗脱剂体系和极性。你给的信息看，极性真的很大呀。你确定是用石油醚乙酸乙酯体系么？在你的体系和极性下，你的板3个点距离怎样，你要看三个点分得开不开呀，只看一个点的Rf值是远远不够的。
用硅胶的目数，装多高都和点分得开不开有关，尤其你还是要中间的一个点。
4.2g样品，柱子的大小还是合适的。通常装好柱子先用最小极性的组分也就是石油醚冲一下。后面的梯度没有那么绝对的。多过几个柱子了解了。不动手永远不知道。