关于碱性磷酸酶CIAP的使用

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/24 11:52:13
购买了TAKARA的碱性磷酸酶,失活处理时要求使用苯酚抽提,最后回收沉淀时要求减压干燥,不知道减压干燥是何意?必须减压吗?
PS,问师姐说可以用胶回收代替苯酚抽提,可胶回收的DNA损失很大,做连接也没成功,很郁闷呢,请高人指点啊

减压干燥就是用减压干燥器对微量生物样品进行干燥。常用的就是Eppendorf的concentrator系列减压干燥器。不减压靠室温干燥时间过长。

你胶回收的时候你要的带的DNA量你可以估计一下,然后换算成摩尔数,加载体的时候也计算一下载体的量,二者5:1比例以上混合后连接。

使用CIAP主要是为了防止载体自连,若你的载体分子量够大,回收时直接用1/10V醋酸钠和2V无水乙醇重新沉淀即可。减压干燥只是使干燥速度变快,其实常温常压干燥也是可以的。
胶回收确实会比较纯净,不过回收率较低,不很经济。最后连接时要换算成物质的量,载体:插入片段在1:5~10比较好,不过使用CIAP后,载体自连率降低了,比值可以加大些,1:1~5都是可以的,试试看吧。