法医常用的DNA检测试剂盒及其原理

原理

细胞核染色质DNA断裂是细胞凋亡的标志特征。在细胞发生凋亡时，核酸内切酶被激活，选择性降解染色质DNA，形成50-300 kb的大片段，并进而在核小体连接处断裂，形成180-200 bp或其整倍数的DNA片段，这些DNA片段可从细胞中提取出来，通过琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶染色呈现为梯状条带（DNA Ladder），并据此判断细胞凋亡产生。凯基细胞凋亡DNA Ladder检测试剂盒提供了一种简便、快速地提取染色质DNA的方法，并增加对小片段DNA的回收，从而增强了检测的敏感性。
操作步骤

1． 离心收集105~106细胞（1500×g，5min）于1.5mL微量离心管中；

2． 用PBS洗涤细胞二次（离心1500×g，5min），弃上清；

3． 沉淀的细胞中加入100μL Lysis Buffer，涡旋振荡器上剧烈混合10秒，离心1000×g，5min）移上清于另一1.5mL微量离心管中；

4． 沉淀再加入100μL Lysis Buffer重复上步，合并两次的上清液；

5． 在上述合并的上清液中加入20μL Solution A，再加入20μL Enzyme A， 55℃反应1小时；

6． 加入20μL Enzyme B,37℃，1小时；

7． 加入130μL Precipitant和950μL冷乙醇, 混匀， 置—20℃,1小时以上或过夜；

8． 4℃，12，000-14，000 rpm离心15-30min，小心地弃去上清，收集沉淀的DNA；

9． 加入0.5mL 70%的冷乙醇，洗DNA沉淀，再12，000-14，000 rpm离心20min；

10．弃上清，DNA沉淀于室温干燥10 min后，加入10-15μL TE Buffer，充分搅拌溶解DNA；

11．取上述10-15μL样品加入2-3μL Loading Buffer， 1.5%琼脂糖凝胶电泳（凝胶和电泳缓冲液TBE均加入0.5μg/mL的溴化乙啶）;

12．5