基因芯片中探针携带的荧光DNA和固定在芯片上的DNA那个数量更多?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/24 03:04:24
为什么?

这个问题是这样的:
1.放上去杂交的标记好某一条基因的cDNA的量(探针量)是要大于点在芯片上的该基因的量要多的。因为毕竟一个点就那么几十个微米甚至几个微米。
2.在某个基因点上的固定在芯片的DNA的浓度是要比在此区域能与之配对的探针的浓度要高的。否则如果探针浓度高于固定在芯片上的DNA的浓度的话,那么每一个点上固定的DNA都将被探针结合,亮度变成与固定在点上dna的量有关,那么这时基因芯片就没有意义了。所以浓度一定是固定在芯片上的DNA在它的那个点上比较高。
3.基因芯片上最后扫描出来的亮度,是和该点附近上的能与之杂交的探针的浓度有关(而不是和整个杂交体系中该基因探针的总量有关)。毕竟只有在该点附近的探针能扩散过来与该点相杂交,而远离该点的对应探针根本无法扩散过来杂交。而很多没有扩散过来的探针到最后是被冲洗掉的。这就是为什么在量上是要大于固定在芯片上的DNA的量,但是在点的附近的浓度上又是小于它的。这个概念要细细体会。

正常应该携带荧光的DNA多,不过携带荧光的一般是靶DNA,固定在芯片上的才是探针吧,至于为什么因为点在芯片上的液体量是极少的。

关于芯片上的DNA浓度我认为不成立,因为它已经是固相的了,它与液体中dna的杂交应该是一个动态平衡的过程,一方面受到互补序列的吸引,一方面又自由扩散,所有最后杂交量受液体dna浓度以及环境(包括温度和溶液离子浓度)的影响 ,当然到一定程度就饱和了。

我觉的一般基因芯片应该最求饱和的情况,因为基因芯片是检测基因型的,而不是检测浓度的,信号越强越好,但有时也会控制浓度以防止两个近似的序列产生假阳性信号
而表达谱芯片是依靠两种不同荧光标记的比例来比较两种表达情况的,也不是靠结合的dna量来测量浓度。

做的是CDNA芯片麽?是固定的多,因为你荧光CY3和CY5标记是做探针用的。