northern怎么半干转膜,电压和时间怎么计算?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/25 08:35:58

变性RNA的转移和固定:
(1) 将凝胶转移至培养皿中,用锋利的刀片修去凝胶的无用部分,在凝胶的左上角切取一角作为标记。
(2) 将凝胶置于0.5×TBE中平衡30min。
(3) 用切纸刀裁一张长宽均大于胶1mm 的尼龙膜,切去膜一角,使其与凝胶的切角对应。
(4) 将尼龙膜和6 张与胶大小一致的滤纸置于0.5×TBE中平衡10min。
(5) 将3 张滤纸平铺于电转移装置的金属箔片上(阳极),用玻棒赶走所有气泡。
(6) 将已平衡的尼龙膜平铺于滤纸上,用玻棒赶走所有气泡。
(7) 小心将凝胶置于尼龙莫上,并使两者的切角相重叠,确保胶与膜之间没有气泡。
(8) 将另外3 张滤纸置于胶上,用玻棒赶走所有气泡。
(9) 于最上层加入约15ml转移缓冲液(0.5×TBE)以湿润滤纸。
(10) 将支持框至于胶/膜/滤纸四周,接上阴极电极,盖上安全盖,接上电源供给装置(确保电极插 头连接正确),给予3mA/cm2 的恒流,转移时间一般为30-35min(电转过程中,电压保持在20V左右,若超过25V,则须终止转移)。
(11) 电转结束后,用2×SSC 漂洗尼龙莫。
(12) 将尼龙莫置于一张干的滤纸上,在波长254nm 处按照0.120J/cm2 的剂量照射3min。