关于质粒DNA的一些问题

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/18 14:28:31
这次做了琼脂凝胶鉴定质粒DNA的实验,书上说跑出来的三条带分别为超螺旋,线性,和开环。我想问一下:①这三种质粒DNA在天然的细菌中都存在的还是因为实验操作才产生的?②如果都存在,那一般情况下超螺旋,线性和开环在生物体体内存在的比例大致如何?③超螺旋和开环如何互变,或是只能超螺旋转变为开环?若能请说明一下具体的条件。
愿先生指点一二,小生不胜感激!

书上说的不全对。
琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时,多数情况下你能看到三条带,但千万不要认为你看到的是超螺旋、线性和开环这三条带。碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA,不信的话你用EcoRI来线性化质粒后再进行琼脂糖电泳,就会看到线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。其实这三条带以电泳速度的快慢而排序,分别是超螺旋、开环和复制中间体(即没有复制完全的两个质粒连在了一起)。

至于你的问题:
因为质粒也是需要复制的,所以细菌中肯定有你说的三种形态。要说三种形态的比例,那就要看细菌是否处于质粒复制活跃期了。

天然细菌中应该是以超螺旋形式存在的,而在提取过程中会由于断裂而形成开环和线装结构,因为这样它的分子两端可以自由转动而使分子内的紧张状态完全松弛。断裂过程应该是随机的

After you run plasmid DNA in agarose gel, the 3 bands indicate 3 kinds of DNA, supercoiled, nicked, and circulated. None of them are linearized. That is the reason why you would have a band migrating differently to those 3 bands when you digest plasmid DNA with an enzyme cutting the DNA once.

All the three forms of plasmid should be present in bacteria, the ratio may be variable depending how active the plasmid replication is. When you isolate plasmid from a bacterial culture, you isolate all the different supercoiled forms of the plasmid, and each will migrate differently on the gel, giving you three major