医学微生物学中革兰染色的原理

先用结晶紫或龙胆紫液染色,再加碘液媒染,然后用洒精脱色,最后以沙黄或稀释复红液复染.此法可将所有细菌分为两大类.

凡能固定结晶紫与碘的复合物,而不易被酒精脱色,仍保留紫色和,称为革兰氏阳性菌.

凡易能被酒精脱色,再经复染成红色的细菌,称为革兰氏阴性菌.

1.原理 革兰氏染色的原理尚未完全阐明.目前主要有细菌等电点\化学结构及细胞膜通透性等三种学说:

(1)革兰氏阳性菌等电点在PH2~3,比阴性菌(PH4~5)为低.因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴性菌强.

(2)革兰氏阳性菌含有核糖核酸镁盐,易和结晶紫-碘复合物结合而不易脱色.

(3)革兰氏阳性菌细胞壁及细胞膜的通透性较低.因此,染料和碘的复合物不易为乙醇所溶出.

所以阳性菌仍保持原来的紫色,而阴性菌染成的紫色可被酒精脱掉后复染成红色.

2.染色方法

(1)将涂片经火焰固定,滴加结晶紫染液,染1分钟,水洗.

(2)滴加卢戈氏碘液,作用1分钟后,水洗.

(3)加95%酒精2~3滴于涂片上,频频摇晃3~5秒钟后,斜持玻片,使酒精流去;再滴加酒精,如此反复2~3次,直至流下的酒精无色或稍呈淡紫色时为止,水洗,并将片上的积水轻轻甩净.

(4)滴加沙黄或稀释石炭酸复红染1/2~1分钟,水洗,待干,油镜检查.

3.结果 菌体呈紫色者为革兰氏阳性菌;呈红色者为革兰氏阴性菌.

革兰阳性菌细胞壁较厚乙醇脱色时，肽聚糖层通透性降低与细胞结合的结晶紫与碘的复合物在细胞壁仍保留初染时的颜色。革兰阴性菌壁薄乙醇脱色增加了细胞壁的通透性，初染的结晶紫碘复合物渗出经复染又染上复染的颜色