微生物检测-酵霉

菌落总数测定操作细则
菌落总数是指检样经过处理，在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。菌落总数主要作为判定检样被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在检样中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
1 设备和材料
1.1 温箱：36±1℃。
1.2 冰箱：0～4℃。
1.3 恒温水浴：46±1℃。
1.1 天平。
1.5 电炉
1.6 吸管。
1.7 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
1.8 玻璃珠：直径约5mm。
1.9 平皿：直径为90mm。
1.10 试管。
1.11 放大镜。
1.12 菌落计数器。
1.13 酒精灯。
1.14 均质器或乳钵。
1.15 试管架。
1.16 灭菌刀或剪子。
1.17 灭菌镊子。
2 培养基和试剂
2.1 营养琼脂培养基：按GB 4789.28中4.7规定。
2.2 磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。
2.3 生理盐水。
2.4 75%乙醇。
3 操作步骤
3.1 检样稀释及培养
3.1.1 以无菌操作，将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1∶100的稀释液。
3.1.3 另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。
3.1.4 根据检样卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移