如何制做无菌陪养实验

一、名称：细菌的培养技术
二、材料：
芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌、牛肉膏、蛋白胨、琼脂。
三、器具：
天平、角匙、200mL烧杯、试管、漏斗、量筒、玻璃棒、滴管、胶管、弹簧夹、铁架台、酒精灯、石棉网、三角架、火柴、纱布、棉花、牛皮纸、线绳、标签、接种环、精密pH试纸(或pH计)、金属小筐、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱。
四、试剂：
NaCl、1mol/L的NaOH溶液、体积分数为75％的酒精溶液、蒸馏水。
五、方法步骤：
（一）培养基的配制
1.称量 用天平称取0.5g牛肉膏、1g蛋白胨、0.5gNaCl、2g琼脂。将称好的牛肉膏、蛋白胨和NaCl放入烧杯。
2.溶化 向上述烧杯中加入蒸馏水100 mL，用玻璃棒搅匀后，放到酒精灯上加热。当牛肉膏和蛋白胨溶化后，加入琼脂，并继续用微火加热。在琼脂溶化的过程中，要控制火力的大小，并且不断搅拌，以免培养基溢出或烧焦。待琼脂完全溶化后，补加蒸馏水至100mL。
3.调pH 用滴管逐滴滴入1mol/L的NaOH溶液，边滴边搅拌，并随时用pH试纸测pH，直到pH为7.4～7.6为止。
4.培养基的分装 将培养基趁热分装到洁净的试管中，培养基的高度约为试管高度的1/5。注意：分装时不要将培养基沾在管口和试管上段，以免引起污染。
5．加棉塞 培养基分装完毕以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好。加棉塞时，应使棉塞长度的2/3在试管口内。
6．包扎 每10支试管用线绳捆成一捆，并且在管口外面包上一层牛皮纸，然后，用线绳扎好。在每捆试管外挂上标签，注明培养基名称、配制日期和制作者姓名。

（二）灭菌
1．打开高压蒸汽灭菌锅，将里面的灭菌桶取出，向锅内加水(最好用开水)，水面与底架平齐为宜。
2．将扎好的试管管口向上竖放在灭菌桶内，再将灭菌桶放回灭菌锅。注意：灭菌桶内的物品不能放得太挤，否则会影响灭菌效果。
3．加盖，并将排气软管插入灭菌桶的排气槽内。以两两对称的方式，同时旋紧相对的两个紧固螺栓，以防漏气。
4．排出锅内的冷空气。接通电源，当压力上升到49kPa时，打开排气阀放气，当压力降到0时，关闭排气阀。