做PCR的时候为什么同样的东西同样的操作,结果就是会不一样呢,有时候连带都不出,

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/15 07:49:42
以前用同样的模板浓度跑就有带了,现在却是弥散的带,很拖,我该怎么办

首先,确认你的引物和模版,buffer和Taq酶没有拿错别的
其次,你的引物和模版是如何保存的?会不会因为保存不当而降解了。具体方法就是拿别人的模版或者已知有效的模版再做一次,如果是质粒,可以直接抛个电泳,如果是cDNA之类的,可以用GAPDH之类的做一下看看
第三,用别的仪器做一个对照,看看仪器的升降温是否出了问题

那有什么办法
不停的做呗~~~
作实验就这么回事

检查仪器,或者其他什么原因!或者是某些步骤没作到位,做理学实验就是这样!要有耐心,要不然不天天有人拿诺贝尔,生物实验可能N个实验才成功一个!

我也遇到过这种事情,后来没办法,干脆不做了,让别人在做的时候顺带着做一下,结果好多了。过了段时间再做的时候就好了。
大概是因为重复做一件简单的事情多了就有点厌,又没什么技术含量,就很松懈,很多操作都变得不太规范,放一段时间又恢复了耐心。
你不妨试试自己不做,让别人帮你做几次看看。

用pcr产物做模板,很容易产生这样的结果

有可能是Taq酶出了问题,更有可能是PCR仪的温度有问题,如果是多孔的PCR仪,换个孔试试吧,不要以为PCR仪的每个孔的温度都和显示的一样,这里面出问题的事情多着呢。