鼠李糖的检测方法有哪些》?? 最好用紫外可见光度计

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/15 05:04:09
说明原理.

检测原理:表面活性剂糖脂分子结构中含有五碳糖,在热浓硫酸的作用下,脱水生成糖醛类化合物,糖醛类化合物与酚类化合物(3,5—二羟基甲苯、苔黑酚)反应,缩合生成有色物质,在可见波长421nm处有最大吸收峰,在标准曲线上确定相应的糖脂浓度,以此进行生物表面活性剂的定量分析。

方法一、3,5—二羟基甲苯—硫酸法
将培养液离心后,取0.2ml酸化上清液,用1.0ml乙醚抽提三次,合并提取液,蒸发掉乙醚,加1.0ml0.05mmol/LNaHCO3溶液溶解,加1.8ml质量分数ω=0.19%3,5—二羟基甲苯(溶解在53%SO4中),在80℃加热30min,然后室温冷却15min于421nm处比色定量。

方法二、苔黑酚反应
将发酵液1ml+9ml苔黑酚的硫酸混合液(60%硫酸和1.6%苔黑酚按5:1混合),混合后于80℃恒温30min,然后冷却15min,于421nm测定吸光度。标准品按一定浓度梯度稀释按上述方法同样测定,制作标准曲线,从而确定糖脂的浓度。

方法三、蒽酮法
将5ml发酵液+10ml乙酸乙酯混匀,萃取,取溶剂层0.05ml到试管中;用N2流除去干扰蒽酮显色的溶剂;加入1ml蒸馏水和5ml0.2%蒽酮硫酸溶液(硫酸/水=75%)显色剂;在沸水中加热10min,冷却后在620nm下测定OD值对照标准曲线得到对应的糖脂含量。
方法四
100℃显色15 min,苯酚用量1.0 mL,硫酸用量5.0 mL,于482nm处测定.结果表明,用此方法测定鼠李糖脂