大家帮忙啊!!!!β-葡萄糖苷酶活性测定的方法,越详细越好.

以京尼平苷为底物氨基酸为显色剂测定β-葡萄糖苷酶活力的方法。β-葡萄糖苷酶水解京尼平苷的温度为50℃,pH为5.0,京尼平苷浓度为0.625mmol/L,水解10min后,立即加入1ml1mol/LNa2CO3终止反应,混匀,再加入体积比为1:1的0.2mg/ml的精氨酸溶液,沸水浴显色10min,冷却后于590nm处测光吸收度值。该方法的检测线性范围为0.05～1U/ml,相关系数为0.9998,检测限为0.02U/ml,精密度为1.5%(n=5),回收率为99.5%～101.1%,该方法准确度高,结果稳定。

首先制作对硝基苯酚标准曲线。
取0.1ml适度稀释的酶液,加入0.9m柠檬酸缓冲液(pH5.0 20mM),50度水浴预热10min,加入己预热10min的浓度为5mM的pNPG溶液1ml,温育10min后立即加入1mol/L的Na2CO3终止反应,室温放置5min,410nm处测消光值OD。同时把加热失活的酶液用同样方法处理后作为空白对照。