电泳制样

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/06/15 10:58:37
老师让做实验设计，电泳测小麦叶片总蛋白，电泳的相关步骤容易查到，可怎么制样呢？需要什么药品？
电泳的具体步骤我知道，只是不知道小麦叶片怎么制样？怎样研磨，然后怎么处理。

这是我自己做的关于电泳的实验过程，你可以参考一下，我写成了论文的形式……
你可以在液氮中进行研磨就可以了，其他步骤基本上应该差不多

1、 材料和方法
取鲫鱼心脏、肝、肌肉、脑和血清共五种组织的离心后的分离液，作电泳分析。
电泳采用聚丙烯酰胺作支持物,浓缩胶与分离胶浓度分别如表2所示配制。
试剂名称 配制20ml不同浓度分离胶所需各试剂用量/ml 配制10ml浓缩胶所需试剂用量
5% 7.5% 10% 15% 3%
分离胶贮液 3.33 5.00 6.66 10.00
分离胶缓冲液 2.50 6.50 2.50 2.50
浓缩胶贮液 1.65
浓缩胶缓冲液 1.25
1%TEMED 2.00 2.00 2.00 2.00 1.00
重蒸水 12.07 6.50 8.74 5.40 7.03
混匀后，置于真空干燥器中，抽气10min
1%AP 0.10 0.10 0.10 0.10 0.05
表2 不连续体系凝胶配制
为了防止LDH及其同工酶受凝胶聚合残留物（如AP等）的影响，引起酶的钝化或其他人为的效应，在加样前，应在20mA的条件下预电泳半小时。然后，关闭电源加入心脏、肝、肌肉、脑和血清共五种组织清液和等体积的蔗糖-溴酚蓝的混合液，并注意加入的样品的顺序。以Tris-甘氨酸电极缓冲液，在20mA的条件下电泳四小时。电泳结束后，取下胶板，放入活性染色液中染色，然后用水洗去染色剂。活性染色液如表3所示配制。
贮存液 NAD+ 乳酸钠 NaCl NBT PMS 磷酸缓冲液
用量/ml 4.0 2.5 2.5 10.0 1.0 5.0
表3 LDH活性染色液的配制