【紧急提问】请做过人外周血淋巴细胞培养的朋友帮忙.请问原代培养时所加的PHA(植物凝集素)是多少mg啊?

PHA（自制） 0.1ml 3% 具体的毫克数……配好的试剂直接用移液枪加液就行了。 如果是自己配的话，应该有配置方法，根据这个搜就行了 。

人类外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备方法
试剂
1．培养基：含20％小牛血清和15u／ml肝素的RPMll640培养基。
2．有丝分裂原：植物血球凝集素(PHA)，根据每个批号的效价适量加。
3．有丝分裂阻滞剂：秋水仙素，配制5ug／ml的使用液。
4．低渗液： 0．068MKCI溶液。
5．固定液：l比3的冰乙酸和甲醇，临用前配制。
6．Giemsa染色液：以PH6.8~7.0的磷酸缓冲液稀释成1：9浓度。
步骤
1．取血及接种培养：
肝素抗凝血无菌接种至装有5ml培养液的二个培养瓶中，每瓶接种血液0.5ml，轻轻摇匀后置入37℃温箱内培养72小时。
2．秋水仙素处理：
加入秋水仙素，使用液0.05ml(最终浓度0.05ug／m1)继续培养1小时。
3．标本的制备：
(1) 终止培养后，将培养物倒入锥形离心管内，离心沉淀5分钟(1500转／分)，弃去上清液。
(2) (2)加入预温至37℃的低渗液7-8ml，轻轻打匀，置37℃水浴箱中15分钟。
(3)低渗完毕后，直接加入固定液1ml，轻轻打匀，立即离心5分钟(1500转／分)。
(4)弃去上清液，加入固定液8ml，置室温10分钟。
(5)离心沉淀1500转／分，5分钟。
(6)弃去上清液，再加入固定液8ml，固定10分钟。
(7)离心沉淀1500转／分，5分钟。
(8)尽量吸尽上清液，视管底剩下的细胞多少加入适量固定液(0.3—0.5 ml)，轻轻吹打成细胞悬液。
(9)滴片：取保存在冰水中的冷湿载玻片1张，稍倾斜，用毛细滴管吸取细胞悬液，从高处滴2~3滴于玻片上，立即用口吹气，使细 胞在玻片上散开，然后在酒精灯烘一下(勿全干)，在空气中待干。
4．染色：用Giemsa染色液染色5-10分钟，水洗、待干，即可镜检。
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