发现某种菌具有某种酶的活性,如果想通过大肠杆菌高效表达获得大量的这种酶,如何操作

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/10 05:02:27

先从这种菌中克隆出那种酶的基因(提RNA,再反转录,再根据NCBI上已知的这种基因的序列设计引物,PCR扩增出目的基因)。

如果上述引物上已经有酶切位点了,直接用酶切质粒,将目的基因连到质粒上,再用这个质粒去转化大肠杆菌感受态。将转化的大肠杆菌涂到加有抗生素的培养基上(抗生素种类依据质粒上所带有的抗性基因而定)。鉴定培养基上长出的菌落,即可。

如果引物上没有酶切位点,还要再设计带有酶切位点的引物,扩增出基因,以下相同。

如果大肠杆菌也能够合成这种物质,就可以通过对大肠杆菌的基因进行改造,得到高效表达的菌种。这种菌种改造技术一般采用的方法是对合成目标化合物的限速酶进行倍增、加大能量供给、减少其它的竞争通路等手段。由于工程上的需要,最好在细菌发酵早期细菌能够正常倍增,此后能够通过加入一种“指令”物质,让细菌进行特定物质的生产。
对于国际上前沿的实验室,以上技术都是可以实现的。

用转基因技术啊,
将该眉基因提取出来(鸟枪法或合成法)和质粒用同种DNA内切酶处理,在混合用DNA连接酶处理,导入大肠杆菌内,检测